Practica: Determinacion de glucosa en la orina

Practica

“IDENTIFICACIÓN DE GLUCOSA EN ORINA”

Objetivo:

Al termino de la practica el alumno, habrá identificado glucosa en orina (glucosuria).

Introducción:

El examen general de orina (EGO) es una prueba de gran importancia para el clínico y para el paciente mismo, sin embargo esta área, al igual que la del coprológico, son vistas con cierto recelo, esto se debe al tipo de muestra que en ellas se analizan. Para algunos químicos, no pasa de ser una simple rutina engorrosa, donde lo único que se puede realizar es la lectura de tiras y la vista al microscopio, pero el uroanálisis es algo más que la simple impregnación de la tira y la observación del sedimento, es la aplicación de todos nuestros conocimientos y el empleo de todos nuestros recursos dentro del laboratorio para proporcionar al médico y al paciente resultados de y con calidad.

La tira reactiva se utiliza para la determinación simultánea de semicuantitativa de diez parámetros en orina: la densidad especifica, PH, leucocitos, nitritos, proteína, glucosa, cuerpos cetonicos, urubilinogeno, bilirrubina, y la sangre. Para la evaluación por fotometría de reflectancia con los instrumentos Urisys  o Urilux S.

Características:

Las tiras reactivas de orina para la determinación  de determinadas sustancias urinarias que desempeñan un papel importante en trastornos renales, urinarios, hepáticos, y metabólicos.

Principio del test:

Gravedad específica: el ensayo detecta la concentración de iones en orina. En presencia de cationes, un formador de complejos libera a los patrones que producen un cambio cromático en la solución indicadora azul de bromitol.

PH: el papel de ensayo contiene, rojo de metilo, fenolftaleína y azul de bromitol, y reacciona específicamente con los iones H+. El pH de orina fresca en personas sanas se sitúa entre y

5 y 6.

Leucocitos: el test revela la existencia de esterasas de granulocitos. Estas esterasa segmentan un éster indoxil cuyo indoxil liberado reacciona con una sal de diazonio para producir un color violeta.

Nitrito: la reacción revela la presencia de nitritos y por lo tanto indirectamente la existencia de bacterias en orina, tiñendo la zona reactiva de rojo-rojizo.

 Proteína: el test se basa en el principio de error proteico de un indicador del pH.

GLUCOSA: La determinación de glucosa se basa en la reacción especifica de la glucosa- oxidasa/ peroxidasa (GOD/POD) (reacción que ocurre  a la hora de medir glucosa en sangre). El ensayo no depende del pH ni de la densidad especifica de la orina ni se ve afectado por la presencia de cuerpos cetonicos.

Cuerpos cetonicos: presenta una mayor sensibilidad frente al acido acetoacetico que frente a la acetona.

Urubilinogeno: una sal de diazonio establece reacción casi inmediatamente con el urubilinogeno.

Bilirrubina: se basa en la unión de bilirrubina a una sal diazoica .La mas leve coloración indica un resultado positivo es decir, patológico.

Sangre: la hemoglobina y la mioglobina actúan de forma similar a la peroxidasa catalizando la oxidación del indicador por el hgidroperoxidoorganico contenido en la tiran del papel

Reactivos:

Cada ensayo contiene por cada 1 cm² de zona de test:

Densidad: 182,8 _ug de EGTA: 36 ug de azul de bromitol.

pH: 13,9 de azul de bromitol.1,2ug de rojo de metilo,8,6 ug de fenolftaleína.

Leucocitos: 15,5 ug éster de ac, indoxicarbonico; 5,5ug de sal de metosimorfolinobencenodiazonio.

Nitrito: 33,5 ug de 3 hidroxi.1, 2, 3,4-tetrahidro-78- benzoquinolina; 29,1 uh de sulfanilamida

Proteínas: 13,9 ug de 3’3”5’5”-tetraclorofenol-3,4,5,6-tetrabromosulfoftaleina.

Glucosa: 103,5  ug de 3,3’55’-tetrametilbencidina;6 U de GOD, 35U de POD.

Cuerpos cetonicos: 157,2 ug de nitroprusiato de sodio.

Urubilinogeno: 67,7ug de tetrafluoroborato de 4-metosibencenodiazonio

Bilirrubina: 16,7 ug de 2,6-diclorobenceno tetrafluoroborato de diazonio.

Sangre: 52,8 ug de 3,3’,5,5’ –tetrametilbencidina; 297,2ug de -2,6 –dimetil -2,5 dihidroperoxihexano.

Medidas de precaución y advertencias:

Para el uso diagnostico in vitro.

Observe las medidas de precaución usuales para la manipulación de reactivos.

Elimine  los residuos según las normas locales vigentes

Conservación y estabilidad:

Conservar el tuvo a un a temperatura de entre 2°C y 30°C. Las tiras reactivas permanecen estables en su embace original sin abrir hasta la fecha de caducidad.

Cierran perfectamente el tubo después de sacar una tira.

Obtención y preparación de la muestra:

Emplear orina fresca sin centrifugar. La muestra de orina no debe dejarse por mas de 2 hrs. Antes de analizarla. En caso de dejar reposar por más tiempo mezclar bien antes de usar.

Emplear solo recipientes limpios y bien enjuagados para recoger la orina. Los restos de desinfectantes de gran poder oxidante en el recipiente de recolección de muestras pueden arrojar resultados falso-positivos para la sangre i glucosa. No añadir conservante a la orina. No exponer la orina ala luz del sol ya que esta induce la oxidación de la bilirrubina y el urubilinogeno produciendo consecuentemente resultados falsos-disminuidos para estos parámetros.

Para la obtención y preparación deblas muestras emplear exclusivamente tubos o recipientes de recogidas apropiados.

Material:

Tira  reactiva

Instrumento urisys 1100

Equipo de laboratorio usual.

Técnica:

1.- Para la evaluación de las tiras reactiva del test Combur Test UX, sírvase leer el manual del operador del instrumento utilizado. Mezcle bien la muestra de orina.

2.- Saque una tira reactiva del tubo. Tape el tubo con el tapón desecante original inmediatamente después de sacar la tira reactiva. Esto es importante para evitar que entre humedad que pueda desteñir las áreas del test llevando a resultados incorrectos.

3.- Sumerja brevemente la tira en la orina (aprox. 1 segundo) asegurándose de mojar todas las zonas del test.

4.- Al retirar la tira, escurra el exceso de orina en el borde del recipiente.

5.- Seque brevemente (aprox. 1 seg.) el lado lateral y el reverso de la tira reactiva sobre el papel absorbente.

6.- Inmediatamente después, inserte la tira en el instrumento según las instrucciones del manual del operador del instrumento. En caso de lectura visual, esperes 60 seg (60-129 seg para los leucocitos) y compare las zonas de reacción don los colores  de la mezcla cromática de la etiqueta del tubo. Los cambios de color que se producen únicamente en un lado de la zona de test o solamente al cabo de 2 min no tiene ningún significado diagnostico.

Control de calidad:
NOTA: Si se utilizan frasco con cuentagotas o pipetas  para aplicar el material de control pueden obtenerse valores erróneos.

Sírvase cumplir con las regulaciones gubernamentales y las normas locales de control de calidad pertinentes.

Calculo:

Una vez que el analizador acepte la tira del ensayo, esta se mide por fotometría de reflectancia. Los resultados se calculan automáticamente y se imprimen en forma de reporte como “negativo” ”positivo” ”normal”. O indicando los valores de concentración.

Al igual que los resultados obtenidos por comparación óptica de color, cada valor impreso corresponde a un intervalo de concentración definido. Sin embargo, debido a que en el ojo humano y el sistema óptico del instrumento poseen diferentes sensibilidades  espectrales,  los valores obtenidos por las lecturas visuales y los obtenidos por el instrumento no siempre concuerdan con  precisión.

Valores teóricos:

Cada laboratorio deberá comprobar si los intervalos de referencia pueden aplicarse a su colectivo de pacientes y, en caso necesario, establecer sus propios intervalos de referencia.

Bibliografía:

Compedium Visual Urinalysis with Test Strips, REF 12254620

http://www.monografias.com/trabajos7/geor/geor.shtml

Conclusion:

Resultados:

Cuestionario:

1. ¿ Que es la glucosa?

2. ¿Que tiempo no debe sobrepasar para utilizarse la orina?

3. ¿Que instrumentos se utilizan en la determinación de la glucosa?

4. ¿En que se basa la determinación de la glucosa?